蛋白质样品质量的好坏直接影响到下游实验应用(WB、IP等),不同的实验对蛋白质样品的要求也不尽相同(天然蛋白/变性蛋白)。蛋白质样品制备时,大多实验室采用化学裂解法破坏细胞膜以释放细胞内的可溶性物质,化学裂解法主要采用裂解液处理,实验室常用的RIPA裂解液就属于化学裂解法。RIPA裂解液的工作原理是利用去污剂等裂解细胞膜(包括核膜),从组织或细胞中抽取可溶性蛋白,RIPA裂解液的配制方法有很...
5周内获得基因敲除细胞系1、选择敲除的基因位置和Cas9X™敲除载体构建:(2周)我们一般选择1-10kb做为基因敲除的片段大小,这个大小的效率比较合适;一般选择能够非三倍数的外显子做敲除,这样的片段敲除的同时还可以导入移码,对后续的蛋白残基的效果也更好一点;然后就可以合成gRNA序列,通过PCR的方式将目的gRNA构建入敲除载体中,经过测序后就可以用于后续的实验;2、细胞的准备与转染:(2...
基因组编辑涉及基因组中特定 DNA 序列的删除、插入或修改。研究人员一直试图开发简单高效的基因组编辑工具以解决各类问题。例如,如果能够简单地敲除导致某种遗传疾病的基因,基因治疗就可以迅速发展;或者,我们可以编辑作物的 DNA 来提升产量和控制病害;同样,细菌基因组也可以被修改以满足不同的工业应用。终于,研究人员的努力取得了成功,开发出了 CRISPR 这一几乎可以编辑任何 DNA 位点的分子...
关于:Matrigel matrix在体内,基底膜是以细胞为基础的薄层细胞外基质。康宁 Matrigel matrix 是从富含胞外基质蛋白的 EHS 小鼠肿瘤中提取的基底膜基质,其中含有约 60%层粘连蛋白、30% IV 胶原和 8%的巢蛋白。康宁 Matrigel matrix 还含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、组织纤溶酶原及其他生长因子。一、包被涂层方法:康...